一、细胞培养条件

**细胞名称**：人卵巢癌细胞A2780
**生长特性**：贴壁生长
**冻存条件**：无血清冻存液
**培养体系**：1640培养基 + 10% FBS + 1% L-谷氨酰胺 + 1% P/S
**传代方式**：第一次推荐1:2传代，传代后建议每两天更换培养液。
**备注**：请使用无菌离心管收集瓶内培养基，作为对照培养。如果对照效果不理想，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞处理

收到细胞后，待培养至良好状态后，灌满完全培养液并封好瓶口，确保细胞的最佳运输状态。使用75%酒精对细胞瓶进行消毒，操作后放置于超净工作台内，并将其置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态。使用显微镜观察细胞生长情况，并进行不同倍数的摄影（建议40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片是重要的售后依据，未提供照片默认细胞到达时状态良好。同时，确保在放入培养箱时将瓶盖松开。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

当细胞汇合度未超过80%时，将瓶中的完全培养液收集至离心管中，留5ml培养基，放入37℃、5% CO2孵箱培养。如果细胞密度超过80%，则可进行传代，步骤如下：

弃去培养上清，并用不含钙、镁的PBS缓冲液洗涤细胞1-2次。
向培养瓶中添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞变化，若细胞大部分变圆并脱落，迅速取回并轻敲几下，加入5ml完全培养基终止消化。
轻轻吹打细胞使其完全脱落后，吸出悬液转移至15ml离心管中，以1000 RPM离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
将细胞悬液按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

当细胞生长至瓶内80%覆盖时，弃去培养液，并用PBS清洗细胞一次。
添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液后，用显微镜观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打使之脱落，然后移至15ml离心管中以1000 RPM离心5分钟。
弃去上清液，向沉淀中加入1ml的无血清冻存液（雅吉生物，货号：C7001），混匀后置入冻存管中。
将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若需转入液氮罐，需在-80℃保存24小时以上后再转入液氮罐。

c. 细胞复苏

从液氮中取出细胞冻存管（请佩戴防护面具），快速置于37℃水浴中解冻，直至冻存管内无结晶，然后用75%酒精擦拭冻存管外壁。
将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，以1000 RPM离心5分钟处理。
弃去上清液，加入5ml完全培养基重悬细胞，并接种至T25培养瓶中，放于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
第二天更换新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

对于某些特殊细胞，如附着不牢，在运输过程中可能会发生脱落情况，这是正常的现象。请将所有培养液收集至离心管，1000 RPM离心5分钟，收集上清做过渡培养。加入胰酶1-2ml轻轻吹打，重悬后消化1-2分钟，最后用5ml完全培养基终止反应，继而离心和重悬，再按1:2比例进行分瓶传代，补充新培养基后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

五、售后条款

**重发政策**：
1）若细胞在运输过程中出现问题（如丢失、破损等），将予以重发。
2）细胞污染问题需在收到后48小时内提供实验结果，经核实后重发。
3）若常温发货的细胞静置24小时或干冰发货的细胞复苏后24小时未存活，需提供清晰的细胞状态照片，则可重发。
4）若在细胞活性方面存在问题，需在收到产品7天内提供实验结果，用台盼蓝染色法检测活力，核实后重发。
5）如在两天内未告知，则视为产品合格。
**不予重发的情况**包括但不限于：客户操作不当、非推荐培养体系导致的细胞状态差等情况。

使用尊龙凯时提供的细胞培养指导，确保您的实验顺利进行，提升研究效率与成果。